也门铁ISSRPCR反应体系优化及应用

【目的】优化大旗瓣凤仙issr-pcr反应体系,为大旗瓣凤仙遗传多样性分析提供技术参考。【方法】利用正交试验设计对大旗瓣凤仙issr-pcr反应体系的5个因素(mg2+、dntp、引物、taqdna聚合酶、模板dna)4水平进行优化分析,并在此基础上对pcr反应过程中的退火温度进行筛选。【结果】建立了大旗瓣凤仙issr-pcr的优化反应体系,即在25.0μl反应体系中含1×pcrbuffer、mg2+1.5mmol/l、dntp0.25mmol/l、引物0.8μmol/l、taqdna聚合酶0.75~1.00u、模板dna100ng。通过该体系可以筛选出6条对大旗瓣凤仙种群扩增效果较好的引物。【结论】优化的issr-pcr反应体系具有较高的稳定性,可用于大旗瓣凤仙及凤仙属植物种群的issr遗传多样性分析。

对影响三角梅issr-pcr扩增反应的各个参数进行优化,建立适合三角梅的issr反应体系:pcr反应体积为20μl,其中10×buffer(含mg2+)2.0μl,dntp250μmol/l,taq酶1.0u,引物0.3μmol/l,模板dna20ng。扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min,51.6℃退火1min,72℃延伸2min,34个循环;最后72℃延伸7min。该反应体系标记点位清晰、稳定、重复性好,适宜三角梅issr分析,为应用issr技术鉴定三角梅种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础。

利用正交设计试验,对影响issr-pcr的mg2+、dntps、引物、taqdna聚合酶和模板dna5个因素进行优化试验。结果表明:25μlissr-pcr反应体系中各因素的最佳条件为mg2+2.5mmol/l、dntps0.25mmol/l、引物0.2μmol/l、taqdna聚合酶1.0u,模板dna40ng。通过对狗牙根issr-pcr最佳反应体系进行梯度退火试验,得到引物ubc881的最佳退火温度为50.5℃。该体系在24个狗牙根种质中获得较好的扩增结果,该优化体系为今后利用issr技术进行狗牙根属种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。

以西洋杜鹃(rhododendronhybridum)叶片提取的基因组dna为材料,用引物ubc880(序列为ggagaggagaggaga)研究了pcr反应体系的主要成分及退火温度对该种植物issr扩增结果的影响。确立了可用于西洋杜鹃issr-pcr分析的最适宜的pcr反应体系:20μlpcr反应体积中,含10ng模板dna,0.25mmol.l-1dntps,2.0mmol.l-1mg2+,1.0utaqdna聚合酶,0.4μmol.l-1引物,并确定引物ubc880的最适退火温度为54.4℃。pcr扩增程序:94℃预变性5min,94℃变性45s,54.4℃退火45s,72℃延伸1.5min,共40个循环后,72℃延伸7min,4℃保存。应用该issr体系对11份西洋杜鹃种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。

为建立鹅掌楸简单序列重复区间扩增issr的pcr优化反应体系,以鹅掌楸叶片基因组dna为材料,系统地测试了模板dna、引物、dntps、mg2+浓度、taqdna聚合酶用量及退火温度对issr-pcr反应体系的影响。结果表明:优化的pcr反应体系为:20μl总体系中,含30ng模板dna,0.3μmol.l-1随机引物,0.2mmol.l-1dntps,1.4mmol.l-1mg2+,0.8utaqdna聚合酶;最佳退火温度为60℃;pcr反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min,60℃退火45s,72℃延伸2min;45个循环;72℃再延伸7min。

[目的]建立贯叶连翘的issr-pcr反应体系,并对其条件进行优化。[方法]以贯叶连翘基因组dna为模板,用l16(45)正交试验设计系统分析引物浓度、taqdna聚合酶浓度、mg2+浓度、dntp浓度和模板dna浓度5种因素对贯叶连翘issr-pcr反应扩增结果的影响。[结果]正交试验设计的方法可以用于贯叶连翘issr-pcr反应体系的建立,经过优化得到贯叶连翘issr-pcr反应体系的最佳条件为:20μlissr-pcr反应体系中含10×pcrbuffer,mg2+浓度1.2mmol/l,taqdna聚合酶浓度50u/ml,dna浓度20ng/μl,dntp浓度250μmol/l,引物浓度0.75μmol/l。[结论]试验建立的贯叶连翘的issr-pcr反应体系重复性好、分辨率高,结果稳定可靠。

比较ctab法和sds法提取叉叶苏铁(cycasmicholitzii)的总dna,发现ctab法是提取叉叶苏铁总dna的较好方法;对叉叶苏铁issr-pcr反应体系中的4个主要因素dntps,taqdna聚合酶,引物及mg2+进行最优条件筛选;采用单因素法探讨dna模板量、退火温度和循环次数的最佳反应条件,建立了适合于叉叶苏铁的最佳issr-pcr反应体系(20μl体系):1×buffer,75ngdna模板,dntps250μmol·l-1,taq酶1.0u,引物0.2μmol·l-1,mg2+2.5mmo·ll-1,反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性1min,52℃退火1min,72℃延伸2min,循环40次,72℃延伸10min,4℃保存。本研究结果为苏铁纲植物的分子生物学和分子系统学研究提供理论参考。

以sds法提取的结缕草(zoysiaspp.)叶片dna为模板,应用正交试验设计,从mg2+、dntp、引物和dna聚合酶并通过比较不同浓度的模板dna对pcr扩增的影响,确立结缕草属植物issr-pcr反应的最佳体系。结果表明:各因素不同浓度对pcr反应结果有显著影响,正交设计可以用于issr反应体系建立,该方法建立的结缕草属植物issr-pcr优化反应体系为10xbuffer7、0ng模板dna、mg2+2.0mmol.l-1、dntp150μmol.l-1、primer0.3μmol.l-1、taqdna聚合酶1.0u,总体积20μl;经对11份结缕草属植物进行检验,证明该体系稳定可靠。该体系的建立可为今后利用issr标记技术进行结缕草属遗传多样性研究、种质资源鉴定和亲缘关系分析等提供依据。

采用单因子和正交设计2种方法,对影响广玉兰issr-pcr反应体系的5个因素(taq酶、mg2+、dntp、引模板dna)进行优化。结果表明:正交设计采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平与单因子试验找出影响因素最佳反应水平有一定差异,通过综合比较分析,最终建立了广玉兰issr-pcr的最佳反应体系:在20μl的反应体系中,taqdna聚合酶1.0u、mg2+1.2～1.5mmol/l、dntp1.80mmol/l、引物0.5～0.6μmol/l、30ng模板dna、10×pcrbuffer。同时,通过pcr比较,确定延伸时间为2min,循环次数为35个较为合适,确定了引物最佳退火温度,得到了广玉兰issr-pcr反应的最佳扩增程序。

采用单因子试验和正交设计方法,对影响阔叶十大功劳issr-pcr反应体系的引物、taqdna聚合酶、dntps、模板dna及退火温度5个因素进行优化,为探讨阔叶十大功劳种质遗传多样性奠定基础.结果表明:阔叶十大功劳issr-pcr的最佳反应体系为:在20μl反应体系中,0.5μmol/l引物、0.5utaq酶、150μmol/ldntps和20ng模板dna.在最佳反应条件下,从80条引物中筛选出15条扩增稳定、多态性丰富的issr引物,并经过9份阔叶十大功劳种质检验,证明该体系具有扩增条带清晰、稳定、重复性好等优点.综上所述,本文所建立的issr-pcr反应体系可用于阔叶十大功劳的种质鉴定及遗传多样性分析.

issr标记能揭示出种间、种内遗传变异情况,更好地揭示亲缘关系和遗传多样性。以大花萱草的5个品种为试材,研究了影响大花萱草issr-pcr扩增效果的各项因素,建立了适合大花萱草issr-pcr的最佳反应体系:20μl反应体系中,10×buffer2μl,dntp0.2mmol/l,mg2+浓度1.5mmol/l,引物浓度0.5mmol/l,taq酶10.002nkat,dna模板20ng。大花萱草的最佳issr扩增反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性40s,50℃退火45s,72℃延伸1.5min,共40个循环;最后72℃延伸10min。通过该反应程序进行的大花萱草issr扩增可获得清晰、稳定的条带。

采用单因子试验与正交试验的方法,研究了海南龙血树(dracaenacambodianapierreexgagnep)issr-pcr反应体系中的主要影响因子,筛选出16条有效引物并优化了它们的退火温度,此外还检测了体系的重复性。优化后的25μl反应体系包含:10×pcrbuffer2.5μl,3.0mmol/lmgcl2,300μmol/ldntps,taq聚合酶3.0u,引物0.2μmol/l,dna模板20ng。该反应体系可用于海南龙血树的遗传多样性和遗传结构的分析。

基于VISSIM的城市交叉口改善优化研究

Liss钢板

主要从遗传多样性研究、亲缘关系与分类学研究和种质资源鉴定研究3个方面介绍了issr分子标记在园林植物中的应用,并探讨其存在的问题。

以假俭草叶片dna为模板,采用正交试验设计,以mg2+、dntp、引物和taqdna聚合酶4种因素3个水平,对假俭草srap反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板dna对扩增效果的影响,建立了假俭草的srap最佳反应体系。结果表明,假俭草srap-pcr最佳反应体系为:2μl10×pcrbuffer、60ng模板dna、mg2+1.50mmol/l、dntp260μmol/l、引物0.25μmol/l、taqdna聚合酶0.5u,总体积为20μl。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以mg2+浓度影响最大,taqdna聚合酶的影响最小。运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个srap引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用srap标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据。

以石家庄地铁1号线北人站(建设大街和中山路交叉口)为例,在交通量调查的基础上,对北人站交叉口交通情况用vissim仿真软件进行仿真,针对原方案的缺点对现有交通导行方案进行优化。交通方案优化后,再用vissim仿真软件进行仿真,以平均排队长度和交叉口延误为参数,以信号控制交叉口服务水平评价指标为标准,查看优化方案仿真结果是否满足信号控制交叉口服务水平评价指标的要求;若满足交叉口服务水平评价指标的要求,则此方案即为优化方案,若不满足交叉口服务水平评价指标的要求,则继续寻找不足和缺点,继续优化,直到满足交叉口服务水平评价指标为止。文章为将来vissim在方案优化中的应用提供必要的参考。

外国某三维地震勘探项目是东方地球物理公司在海外第一个采用iss加无线节点技术、dss系统、无桩号测量、连续记录方式施工的项目,平均日效达到5283炮。该项目中可控震源应用了ve464控制系统及多个辅助设备,相比常规可控震源施工方式存在许多不同之处。本文就ve464震源控制系统应用在issn施工中的技术难点进行了详细的介绍。

该文利用软件vissim对天津开发区现代服务产业区地下交通空间的交通进行模拟建模,并通过vissim得出的一系列路网性能指标,如路网平均车速、路网延误总和、停车率、排队长度等,并与定性分析进行综合比较,讨论vissim在实际工程利用中的方法与意义。

利用离子土壤固化剂加固武汉市汉阳区红粘土,红粘土首先通过不同配比iss水溶液的处理,然后进行阿太堡试验、击实试验、剪切试验。试验结果表明:红粘土在加入iss后,塑性指数降低,最大干密度变大,粘聚力提高;此外,在最佳含水量下,密度对固化土抗剪强度参数的影响具有一定的规律性,其抗剪强度参数与压实度(密度)呈很好的线性关系,具体表现为粘聚力随密度的增加而增加,内摩擦角随密度的增大而减小。

JISS2093-1993

地理图形信息技术已在工程审计、国土资源审计中得到积极应用，如利用gis和gps搜索定位可能污染企业；利用gis结合autocad很好地确认工程造林数量；利用gis和gps准确地计算工程量和运输距离。该文结合具体项目的实施，探讨在项目审计过程中综合利用gis和gps等现代技术设备提高审计效率，提升审计质量。