实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳 原理 一 聚丙烯酰胺凝胶电泳（ polyacrylamide gel electrophoresis, 简称 PAGE），由称盘状电泳。 这种电泳是在区带电泳的基础上， 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物， 采用电泳 基质的不连续体系（即凝胶层的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、 pH 的不连续性及 电位梯度的不连续性） ，使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带（厚度为 10-2cm），然后再进行电泳分离。 圆盘电泳名称来源即由于此法的原理是依靠基质的不连续性（ discontinuity ），凑巧在垂 直柱形凝胶上分散出的区带也很象圆盘状（ discoid shape），取“不连续性”和“圆盘状”的 英文字头“ disc”。因此英文名称为“ disc electrophoresis”，中文直译为盘状电泳。 仪器装置：如 图 A 所示，上下两个
背景:实验表明,软骨细胞在体外培养时,经常发生表型的丢失。但形成软骨细胞团块时可以维持软骨细胞表型,由此人们探讨无支架结构培养组织工程软骨的技术。目的:拟建立软骨细胞聚集培养体系,观察在琼脂糖表面培养软骨细胞,无支架条件下构建组织工程软骨的特点。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-10/2007-04在解放军南京军区总医院骨科研究所完成。材料:SPF级新西兰白兔4只,2周龄,雌雄不限。方法:分离、提取兔关节软骨原代软骨细胞,将低熔点琼脂糖铺于24孔培养板表面,按每孔2.5×105接种提取的兔原代软骨细胞,在培养箱内培养,定期换液。主要观察指标:取10d标本行组织学、Ⅱ型胶原免疫组织化学检测。结果:10d时,软骨细胞自聚集形成有一定形状、大小的类软骨组织,苏木精-伊红染色可见软骨陷窝结构,甲苯胺蓝染色见紫红色异染,说明有蛋白聚糖的分泌。钙染色未见钙化,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色有棕黄色颗粒,说明有Ⅱ型胶原分泌。结论:在琼脂糖表面构建组织工程软骨的培养体系,琼脂糖膜阻止软骨细胞的黏附和伸展,从而保持软骨细胞的圆形形态;软骨细胞在琼脂糖表面直接接触,加强了细胞之间的信息交流,有利于维持细胞的表型,维持软骨细胞分泌细胞外基质的特征。
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