阻抑消减杂交

中文名称

阻抑消减杂交

英文名称

suppressive subtraction hybridization;SSH

定　　义

将阻抑性聚合酶链反应与消减杂交相结合的实验方法，能有效地扩增低丰度的差异基因表达序列。一般是将目标互补DNA(cDNA)5′端分别加上两种人工接头，用过量的驱动DNA进行两次杂交，得到两个5′端有不同接头、不与驱动DNA杂交的目标cDNA，然后用与两种人工接头互补的引物PCR扩增得目标细胞差异表达的cDNA序列。

应用学科

生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）

《闸阀弯管液流系统振动噪声及阻抑》是化学工业出版社出版图书。

闸阀弯管液流系统振动噪声及阻抑

• 出版社： 化学工业出版社

• ISBN：9787122386274

• 版次：1

• 商品编码：12865093

• 品牌：化学工业出版社

• 包装：平装

• 开本：16开

• 出版时间：2021-07-01

• 用纸：胶版纸

• 页数：159

• 正文语种：中文

内容简介

本书采用理论分析、实验研究和数值模拟相结合的方法，对闸阀关闭过程中闸阀弯管液流系统的流固耦合行为进行模拟分析，掌握了壁面湍流边界层引发的压力脉动、振动及噪声分布情况，提出了有效抑制带阀门弯管液流管路系统振动及噪声的结构优化方案，并采用聚酰亚胺树脂基矿物质复合材料设计新型高阻尼减振复合支承座，为抑制液流系统振动及噪声的产生和传播，解决闸板卡涩、磨损等问题提供指导及解决方案。

本书可作为高等院校、企业中从事充液管路系统减振降噪理论和技术研究的科研人员及相关专业师生的参考用书。 2100433B

SSH 即抑制消减杂交技术是由Diatchenko 等于1996 年以m RNA 差别显示技术为基础建立起来的筛选未知差异表达基因的新技术。它主要基于最近出现的抑制PCR , 并结合标准化(normalization 或equalization ) 和消减杂交( substractive hybridization)。抑制PCR 通过利用含引物序列的双链接头(adaptor) 充当引物模板, 使两端接上同一接头的非目的双链片段具有反向末端重复序列, PCR 中不能扩增, 从而达到抑制非目的片段而选择性扩增目的片段的目的。标准化步骤平衡了目的基因群中cDNA 的丰度, 即低丰度差异表达的基因不会丢失, 而高丰度差异表达的基因又不会被过量分离。消减杂交则扣除了目的基因群( tester) 与驱赶基因群(driver) 间的同源序列。

存在于tester 中而不存在于driver 中, 或在tester 中较在driver 中有高水平表达。

①第一次差减杂交,用过量的drivercDNA分别与tester2adaptor1cDNA和tester2adaptor2cD2NA杂交。分别形成SSH技术原理图所示的tester单链片段a、tester双链片段b、tester2driver同源双链片段c和driver单、双链片段d。根据杂交二级动力学,丰度较高的分子产生同源杂交体(homo2hy2brid)的速度较快,使高丰度与低丰度单链片段a浓度大致相等,从而实现tester单链片段a的标准化[6],并使连接一种接头的差异表达基因a初步富集。②第二次差减杂交,将上述分别与drivercDNA杂交后的tester2adaptor1和tester2adaptor2cDNA混合,再加入新制备的变性drivercDNA,因tester2adaptor1和tester2adaptor2cDNA同源,除形成a、b、c、d片段外,又形成了新的连接有两种接头的双链杂交片段e,即连接两种接头的差异表达序列e,是进行PCR指数扩增的模板。

PCR之前填补分子粘性末端以利于退火。第一轮PCR,加入针对adaptor1和adaptor2外侧序列的特异引物进行扩增。结果:a、d片段因没有引物结合位点,不能进行PCR扩增;b片段由于两端均为同一接头,具有反向末端重复序列(invertedre2peats),在单链内部形成互补发卡结构的可能性及稳定性均大于引物与其配对结合的可能性及稳定性,故在PCR反应中不能扩增;c片段的一端为一种接头而另一端无接头,只能线形扩增;只有e片段末端有两种不同接头,可通过PCR作指数扩增。第二次PCR,加入一对与接头内侧序列相同的巢式PCR特异引物,进一步富集差异表达序列并降低背景。经过两轮PCR,基于PCR抑制效应的存在,以及选用了两对引物,可以特异扩增代表了差异表达的cDNA片段。

经上述PCR所得的差别表达基因片段可以利用接头上存在的酶切位点,插入适当载体,转化细菌。经X-Gal蓝白菌落初步筛选,获得具有差异表达cDNA片段的阳性克隆。然后通过Northern杂交鉴定,cDNA序列分析,可获得一些新的ESTs序列,如进一步对该ESTs进行深入的结构和功能研究,可望获得新的具有重要生物学作用的全长功能基因。

抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH) 是建立在抑制PCR 与消运用杂交二级动力学原理，减杂交技术相结合的基础上的更简单快速的分离差异基因的方法。即丰度高的单链DNA 在退火时产生同源杂交的速度快于丰度低的单链DNA，使原来在丰度上有差别的单链DNA 相对含量达到基本一致，利用链内退火优于链间退火的特点，使非目的序列片段两端反向重复序列在退火时产生类似发卡的互补结构，无法作为模板与引物配对从而选择性地抑制了非目的基因片段的扩增。

中文名称

抑制消减杂交

英文名称

suppression subtractive hybridization;SSH

定　　义

将抑制PCR与消减杂交技术相结合的一种快速分离差异表达基因的方法。

应用学科

遗传学（一级学科），基因组学（二级学科）