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聚丙酰胺凝胶电泳

聚丙酰胺凝胶电泳属于分子生物学,属于中性电泳。

聚丙酰胺凝胶电泳基本信息

聚丙酰胺凝胶电泳操作步骤

1.必要时可用KOH/甲醇清洗玻璃板和间隔片。

2.用温热的去污剂溶液洗涤玻璃板和间隔片,再充分漂洗,先用自来水,再用去离子水。应拿取玻璃的边缘部分或带手套操作,以免手上的油脂残留在玻璃板的工作面上。用乙醇冲洗玻璃板,并将其置于一边晾干。

3.(可做可不做)其中一块玻璃板的一面用硅化液处理(如Sigmacote或Acrylease):在化学通风厨内,将玻璃板放于一叠纸巾上,倒少量硅化液于其表面上,用Kimwipes纸巾涂抹均匀,然后用去离子水冲洗、纸巾擦干。

4.安装玻璃与间隔片:

a.将较大的(不带凹口)玻璃板平放在实验台上,在玻璃板的两侧将间隔片平行置于其边缘放妥。

b.用凡士林轻涂以助于间隔片在后面的操作中保持原位。

c.将内板(带凹口的玻璃板)在间隔片上放妥。

d.用夹子或铁皮制纸夹将玻璃板加在一起,将整块玻璃的两边及底部用凝胶密封带封紧,形成不透水密封。

5.根据玻璃板的大小和间隔片的厚度计算所需凝胶的体积。

6.(可做可不做)将所需用量的聚丙烯酰胺:亚甲双丙烯酰溶液放于一干净的带侧臂的烧瓶中,加入磁力搅拌子,抽真空脱气。开始脱气应温和一些,并边脱气边旋转烧瓶直至不再有气泡溢出为止。

灌制凝胶

7.下面的操作需要戴手套,在托盘上进行,以免溅出的丙烯酰胺:亚甲双丙烯酰溶液洒在实验台上。动作应迅速,于丙烯酰胺聚合前完成。

a.每100ml丙烯酰胺:亚甲双丙烯酰溶液中加入35μlTEMED,轻轻旋转混匀溶液。

b.用50ml注射器吸取凝胶溶液,调转注射器,排净进入针管的空气。将注射器的针头插入两块玻璃板之间的空隙,注入丙烯酰胺溶液,几乎注满改空隙。

c.将玻璃板斜靠在试管架上,与实验台面成约10°角。

8.立即将合适的梳子插到凝胶中,小心勿使梳齿下留有泡。梳子的顶端应略高于玻璃板的上沿。用铁皮制纸夹将梳子夹紧,使其就位。必要时,用剩余的丙烯酰胺溶液完全充满模具。确认无丙烯酰胺溶液从模具漏出。

9.丙烯酰胺于室温聚合30~60min。若凝胶回缩明显,应补加丙烯酰胺:亚甲双丙烯酰溶液。

10.聚合完全后,用1×tbe浸润的纸巾包绕梳子和凝胶的顶部。然后用SaranWrap模密封整块凝胶,4℃保存,直至使用。

11.当准备好进行电泳时,在梳子的周围及其顶部喷些1×TBE缓冲液,从聚合的凝胶中小心取出梳子。用注射器吸取1×TBE冲洗加样孔。用剃须刀或解剖刀除去凝胶底部的密封胶带。

上样与电泳

12.将凝胶放入电泳槽中,用大号铁皮制夹子夹住其边缘或用装置本身的夹子固定。带凹口的玻璃板应面对缓冲液槽向里面放置。

13.用配制凝胶溶液同一批次的5×TBE配制电泳缓冲液灌满缓冲液槽。用一根弯头巴斯德吸管或注射针头排除藏匿于凝胶底部的气泡。

14.用巴斯德吸管或注射器再次吸取1×TBE冲洗加样孔。将DNA样品与适量6×凝胶载样缓冲液混合,用Hamilton注射器或带有拉长的塑料吸头的微量移液管加入加样孔。

15.将电极与电源相连(正极接下槽),打开电源,进行电泳。

16.电泳至标准参照染料迁移至所需位置。关闭电源,拔掉插头,弃去电泳槽中的电泳缓冲液。

17.卸下玻璃板,用解剖刀或剃须刀片除去凝胶密封胶带。将玻璃板放在实验台上(硅化的玻璃板在上面)。用间隔片或塑料楔将上面的玻璃板的一角翘起。检查一下凝胶仍应附着在下面玻璃板上。将上面的玻璃板平稳的移开,去掉间隔片。

18.用染色检测或放射自显影检测检测聚丙烯酰胺凝胶中的DNA条带的位置。

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聚丙酰胺凝胶电泳造价信息

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聚丙酰胺凝胶电泳电泳简介

聚丙酰胺凝胶电泳

中性聚丙烯酰胺凝胶电泳

安装电泳装置和配制凝胶溶液

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聚丙酰胺凝胶电泳常见问题

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聚丙酰胺凝胶电泳文献

实验聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验聚丙烯酰胺凝胶电泳

实验聚丙烯酰胺凝胶电泳

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页数: 9页

实验 7 聚丙烯酰胺凝胶电泳 原理 一 聚丙烯酰胺凝胶电泳( polyacrylamide gel electrophoresis, 简称 PAGE),由称盘状电泳。 这种电泳是在区带电泳的基础上, 以孔径大小不同的聚丙烯酰胺凝胶作为支持物, 采用电泳 基质的不连续体系(即凝胶层的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、 pH 的不连续性及 电位梯度的不连续性) ,使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带(厚度为 10-2cm),然后再进行电泳分离。 圆盘电泳名称来源即由于此法的原理是依靠基质的不连续性( discontinuity ),凑巧在垂 直柱形凝胶上分散出的区带也很象圆盘状( discoid shape),取“不连续性”和“圆盘状”的 英文字头“ disc”。因此英文名称为“ disc electrophoresis”,中文直译为盘状电泳。 仪器装置:如 图 A 所示,上下两个

一种耐温型聚丙烯酰胺凝胶堵水剂的室内研究 一种耐温型聚丙烯酰胺凝胶堵水剂的室内研究

一种耐温型聚丙烯酰胺凝胶堵水剂的室内研究

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页数: 3页

一种以聚丙烯酰胺、苯酚、甲醛为主要原料制备的耐温型凝胶堵水剂。考察各组分以不同比例配制时,对凝胶堵水剂各种性能的影响,确定凝胶堵水剂各组分的最佳基本配比。室内研究结果表明,该堵水剂耐温性好,黏度较高,成胶时间可调,适应温度宽,封堵能力强,并且组分简单,原料易得,可用于油田的调剖堵水作业。

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