采用PCR-DGGE等分子生物学技术,从平行AN/AO工艺六个反应池的活性污泥样品中提取总DNA,采用套式PCR(nested PCR)进行两轮PCR扩增,对α-Proteobacteria、β-Proteobacteria的16S rDNA片段进行DGGE(变性梯度凝胶电泳)分离,从而分析活性污泥样品中该类除磷菌的种群结构。结合测序技术并通过NCBI(美国国立生物技术信息中心)基因库比对,证实生物除磷过程中存在着丰富的α-Proteobacteria、β-Proteobacteria,同时可以得到其中优势类群的初步认识。结果表明,PCR-DGGE结合测序技术可以用于污水处理过程中样品的除磷菌群落结构分析。
目的探讨唾液中分泌片SC对敏感菌黏附口腔上皮细胞能力的影响及机制。方法将敏感菌S. sanguis ATCC 10556,S. mutans UA159,S. sobrinus OMZ-176与来源于60例健康志愿者的口腔上皮细胞进行混合培养,采用革兰阳性染色分别观察加入及未加入唾液中SC时敏感菌的黏附能力,采用荧光定量RT-PCR法分别测定加入及未加入唾液中SC时上述3种敏感菌中ALS2与ALS3 mRNA的表达情况。结果在不含SC的唾液上清液+敏感菌(S. sanguis ATCC 10556,S. mutans UA159,S. sobrinus OMZ-176)+口腔上皮细胞体系中,S. sanguis ATCC 10556黏附率最高,三者比较差异有统计学意义(P <0. 05)；在含SC的唾液上清液+敏感菌(S. sanguis ATCC 10556,S. mutans UA159,S. sobrinus OMZ-176)+口腔上皮细胞体系中,S. sanguis ATCC 10556黏附率最低,三者比较差异有统计学意义(P <0. 05)；且含SC体系中,3种敏感菌的黏附率均明显低于不含SC体系中3种敏感菌的黏附率(P均<0. 05)。RTPCR检测结果显示,在不含SC的唾液上清液+敏感菌(S. sanguis ATCC 10556,S. mutans UA159,S. sobrinus OMZ-176)+口腔上皮细胞体系中,不含SC唾液上清液+S. sanguis ATCC 10556+口腔上皮细胞体系中ALS2及ALS3 mRNA表达水平最高,三者比较差异有统计学意义(P <0. 05)；在含SC的唾液上清液+敏感菌(S. sanguis ATCC 10556,S. mutans UA159,S. sobrinus OMZ-176)+口腔上皮细胞体系中,含SC唾液上清液+S. sanguis ATCC 10556+口腔上皮细胞体系中ALS2及ALS3 mRNA表达水平最低,三者比较差异有统计学意义(P <0. 05)；且含SC体系中3种敏感菌的ALS2与ALS3 mRNA表达水平均明显低于不含SC体系中3种敏感菌的表达水平(P均<0. 05)。结论不同敏感菌的口腔上皮细胞黏附能力存在差异,菌株S. sanguis ATCC 10556黏附能力强于S. mutans UA159和S. sobrinus OMZ-176。唾液SC能够抑制敏感菌对口腔上皮细胞的黏附,且对菌株S. sanguis ATCC 10556抑制能力更强,可能与下调ALS2和ALS3基因表达相关。
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