叶绿素测定仪

近年来,随着人们对农业生产地区地表水和地下水污染的日益关注,如何准确地对作物进行氮肥推荐变得越来越重要。很多测试方法都包括土壤、植物采样,样品处理和室内常规分析或田间简易设备测定等步骤。其共同的不足之处就在于都要求样品的采集和处理,从样品采集到提供测试结果需要一段时间。另外许多大田作物在缺氮时会表现出一些肉眼可见的症状,如玉米在缺氮胁迫下,氮从老叶向幼叶转移,导致老叶失绿;相反,供氮过量的植株,叶片颜色深绿,并且延迟作物衰老。通过观测叶片颜色变化来评价作物氮营养状况已经在生产中获得应用。利用叶色作为推荐施肥指标最初是在水稻上开始应用,因为许多应用于旱地作物的土壤和植株诊断方法不适合于水稻。同时叶色也是水稻氮营养比较敏感的指标,叶色与叶片含氮量呈正相关。应用叶色测定植物氮营养状况经历了几个发展阶段:①首先测定光的不同特性;②通过常规浸提方法测定叶绿素含量;③利用标准比色卡比较叶色深浅;④测定光的通过率来反映叶色深浅。水稻种植者常用肉眼观测叶色变化来判断是否缺肥,但是用目视方法来判断绿色深浅受光线影响,属于相对和非定量的方法。Nada最早利用光的发射比率来定量叶色，此后通过叶片颜色来预知植物氮素营养状况的研究越来越多。而就在这时，一种基于测定叶片叶绿素相对含量的便携式叶绿素仪测量方法引起了大家的关注。随着不断的实验验证，叶绿素检测仪已经能够很好的测定作物的氮肥缺失，而且在水稻、苹果、棉花等作物上得到了广泛的应用。

（一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。

（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 电子顶载天平（感量0.01g）；3. 研钵；4. 棕色容量瓶；5. 小漏斗；6. 定量滤纸；7. 吸水纸；8. 擦境纸；9. 滴管。

（三）试剂：96％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉。

1. 取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。2. 称取剪碎的新鲜样品0.2g，共3份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。3. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。4. 用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至25ml，摇匀。5. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm下测定吸光度。

四、实验结果计算：将测定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb：mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。最后根据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：

叶绿素的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×提取液体积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。

叶绿素测定仪可以即时测量植物的叶绿素相对含量（单位SPAD）或绿色程度、叶面温度，从而解植物真实的硝基需求量并且了解土壤硝基的缺乏程度或是否过多地施加了氮肥。可以通过此款仪器来增加氮肥的利用率，并可保护环境。可广泛应用于农林相关科研单位和高校对植物生理指标的研究和农业生产的指导。

叶绿素测定仪TYS-A可同时测量叶绿素、叶面温度两个参数。

快速无损植物活体检测，不影响植物成长。

一次操作可同时测定所有参数，实时显示，且可同时储存

历史数据查看，即可顺序查看，也可跳转查看。

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意外断电后已保存在主机里的数据不丢失。

对于历史数据即可逐条删除，也可以一键式全部删除。

使用锂电池供电，带背光功能。

中英文一键式切换。

每种参数的报表、曲线图均可选择时段查询查看。

显示每种参数过程曲线趋势，最大值、最小值、平均值显示查看，放大、缩小功能。

可将存储记录的数据以EXCEL格式备份保存，方便以后调用。

可将存储记录的数据曲线图以BMP图片格式备份保存，方便以后调用。

​根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。

叶绿素检测仪可以即时测量植物的叶绿素相对含量或“绿色程度”，植物叶片中的叶绿素含量指示了植物本身的状况，长势良好的植物的叶子会含有更多的叶绿素，叶绿素的含量与叶片中氮的含量有很密切的关系，因而叶绿素测量值还能说明植物真实的硝基需求量，通过此款便携式叶绿素测定仪可指导合理施加氮肥，提高氮的利用率，并可保护环境（防止施加过多的氮肥而使环境特别是水源受到污染）。